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蛋白纯化仪器原理(蛋白纯化)

更新时间:2023-09-15 03:41:15

导读 大家好,我是小环,我来为大家解答以上问题。蛋白纯化仪器原理,蛋白纯化很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!1、蛋白质分离纯化的一...

大家好,我是小环,我来为大家解答以上问题。蛋白纯化仪器原理,蛋白纯化很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!

1、蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤: (一)材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。

2、所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。

3、常用的破碎组织细胞的方法有: 1. 机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。

4、常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。

5、 2. 渗透破碎法 这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。

6、 3. 反复冻融法 生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。

7、这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。

8、 4. 超声波法 使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。

9、 5. 酶法 如用溶菌酶破坏微生物细胞等。

10、 (二) 蛋白质的抽提 通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。

11、抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。

12、如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。

13、在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。

14、 (三)蛋白质粗制品的获得 选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。

15、比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。

16、常用的有下列几种方法: 1. 等电点沉淀法 不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。

17、 2. 盐析法 不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。

18、被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。

19、 3. 有机溶剂沉淀法 中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。

20、能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。

21、此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。

22、由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作,选择合适的有机溶剂浓度。

23、 (四)样品的进一步分离纯化 用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。

24、常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。

25、有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。

本文到此讲解完毕了,希望对大家有帮助。

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